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本制品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。


碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。


携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母。


在pH9.8，37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1μmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。

组分	规格
Alkaline Phosphatase(30U/μL)	33.3μL
10×AP buffer	1mL

保存：-20℃，有效期18个月。


10mM Tris-HCl(pH8.0)，1mM MgCl₂，50mM KCl，0.1mM ZnCl₂，50% glycerol。


1×AP buffer：
500mM Tris-HCl pH9.0，10mM MgCl₂。


无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染。

• 在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；
  
• 使用苯酚，可使酶完全失活。

• 该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途。

• DNA去磷酸化
  
  • 在1.5mL离心管中加入下列试剂：
    

    成分	用量
    DNA片段	1～20pmol
    Alkaline Phosphatase	1～2μL
    10×AP buffer	5μL
    无菌ddH2O	至50μL

    注：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
    
  • 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
• 酚氯仿法抽提DNA
  
  • 苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。
    注：推荐在酚提取前将其在含5mM EDTA，0.5% SDS，50μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
    
  • 氯仿/异戊醇(24:1)抽提。
• 乙醇沉淀DNA
  
  • 加入2.5μL 3M NaCl(终浓度150mM)。
    
  • 加入125μL(2.5倍体积)预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30～60min，沉淀DNA。
• 溶解DNA
  离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水(＜20μL)。

相关搜索：碱性磷酸酶(小牛肠)，小牛肠碱性磷酸酶，CIAP，9001-78-9，Calf Intestine Alkaline Phosphatase